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Tierische Zellkulturen
Ein Methoden-Handbuch
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- 420 Seiten
- German
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Tierische Zellkulturen
Ein Methoden-Handbuch
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Inhaltsverzeichnis
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Häufig gestellte Fragen
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Ja, du hast Zugang zu Tierische Zellkulturen von R. Ian Freshney, S.-R. Goan, M. Schütt, H. Schunck, H. Wählte im PDF- und/oder ePub-Format sowie zu anderen beliebten Büchern aus Biowissenschaften & Wissenschaft Allgemein. Aus unserem Katalog stehen dir über 1 Million Bücher zur Verfügung.
Information
Inhaltsverzeichnis
- Abkürzungsverzeichnis
- 1 Einführung
- 1.1 Geschichte der Gewebekultur
- 1.2 Vorteile der Gewebekultur
- 1.2.1 Kontrolle des Kulturmilieus
- 1.2.2 Charakterisierung und Homogenität der Probe
- 1.2.3 Wirtschaftlichkeit
- 1.3 Nachteile der Gewebekultur
- 1.3.1 Sachkenntnis und Erfahrung
- 1.3.2 Zellausbeute
- 1.3.3 Instabilität
- 1.4 In-vitro-Besonderheiten
- 1.5 Definitionen
- 2 Biologie der kultivierten Zelle
- 2.1 Kulturmilieu
- 2.2 Anlegen einer Zellkultur
- 2.3 Entwicklung von Zellinien
- 2.4 „Krise“ und Entstehung kontinuierlicher Zellinien
- 2.5 Entdifferenzierung
- 2.6 Was ist eine kultivierte Zelle?
- 2.7 Funktionelles Milieu
- 3 Planung und Einrichtung eines Gewebekulturlaboratoriums
- 3.1 Steriler Arbeitsbereich
- 3.2 Inkubation
- 3.3 Präparation und Vorbereitung
- 3.4 Reinigung
- 3.5 Aufbewahrung und Lagerung
- 3.6 Bauliche Gestaltung und Ausstattung
- 4 Laborausrüstung
- 4.1 Notwendige Laborausrüstung
- 4.1.1 Inkubatoren
- 4.1.2 Inkubationstemperatur
- 4.1.3 Dampfsterilisatoren
- 4.1.4 Kühl- und Tiefkühlschränke
- 4.1.5 Mikroskope
- 4.1.6 Reinigungsausrüstung
- 4.1.7 Heißluftsterilisatoren und Trockenschränke
- 4.1.8 Wasserreinigung
- 4.1.9 Zentrifugen
- 4.1.10 Kryokonservierung von Zellen
- 4.2 Nützliche Laborausrüstung
- 4.2.1 Laminarbox (Reinraumwerkbank)
- 4.2.2 Zellzählgeräte
- 4.2.3 Vakuumpumpen
- 4.2.4 CO2-Inkubatoren
- 4.2.5 Medienpräparation und Qualitätskontrolle
- 4.2.6 Mikroskope
- 4.2.7 Temperaturaufzeichnung
- 4.2.8 Magnetrührer
- 4.2.9 Rollerapparaturen
- 4.2.10 Pipettierhilfen und automatische Pipetten
- 4.2.11 Mechanische Hilfen und Automatisierung
- 4.3 Nützliche Zusatzgeräte
- 4.3.1 Tiefkühlgeräte
- 4.3.2 Spülmaschinen
- 4.3.3 Fernsehanlagen („closed-circuit television“)
- 4.3.4 Koloniezählgeräte
- 4.3.5 Zellgrößenbestimmung
- 4.3.6 Zeitraffer-Mikrokinematographie
- 4.3.7 Programmierbare Zelleinfriergeräte
- 4.3.8 Elutriationszentrifugen
- 4.3.9 Durchflußzytophotometer
- 4.4 Verbrauchsmaterial
- 4.4.1 Pipetten
- 4.4.2 Kulturgefäße
- 5 Technik des aseptischen Arbeitens
- 5.1 Ziele des aseptischen Arbeitens
- 5.2 Ruhige Zonen
- 5.3 Arbeitsflächen
- 5.4 Persönliche Hygiene
- 5.5 Pipettieren
- 5.6 Steriles Arbeiten
- 5.6.1 Abwischen
- 5.6.2 Verschließen
- 5.6.3 Abflammen
- 5.6.4 Gießen
- 5.7 Laminarbox (Reinraumwerkbank)
- 5.8 Standardprozedur des aseptischen Arbeitens
- 6 Sicherheit im Laboratorium und Biorisiken
- 6.1 Allgemeine Sicherheit
- 6.1.1 Glasgeräte und scharfe Gegenstände
- 6.1.2 Toxische Chemikalien
- 6.1.3 Gase
- 6.1.4 Flüssiger Stickstoff
- 6.2 Feuer
- 6.3 Strahlung
- 6.4 Biorisiken
- 7 Kulturbedingungen
- 7.1 Substrat
- 7.1.1 Glas
- 7.1.2 Einwegplastikmaterialien
- 7.1.3 Mikroträger
- 7.1.4 Sterilisation von Plastikmaterialien
- 7.1.5 Andersartige künstliche Substrate
- 7.1.6 Vorbehandelte Oberflächen
- 7.1.7 Feederschichten
- 7.1.8 Dreidimensionale Matrizes
- 7.1.9 Nichtadhäsive Substrate
- 7.1.10 Flüssig-Gel- und Flüssig-Flüssig- Grenzschichten
- 7.1.11 Perfundierte Mikrokapillaren
- 7.1.12 Kulturgefäße
- 7.2 Gasphase
- 7.2.1 Sauerstoff
- 7.2.2 Kohlendioxid
- 7.3 Medien und Supplemente
- 7.3.1 Physikalische Eigenschaften
- 7.3.2 Mediumbestandteile
- 7.3.3 Serum
- 7.3.4 Serumfreie Medien
- 7.4 Auswahl von Medium und Serum
- 7.4.1 Chargenreservierung
- 7.4.2 Prüfen von Serum
- 7.5 Sonstige Zusätze
- 7.6 Inkubationstemperatur
- 8 Vorbereitung und Sterilisation
- 8.1 Vorbereitung und Sterilisation von Geräten
- 8.1.1 Glasgeräte
- 8.1.2 Pipetten
- 8.1.3 Schraubkappen
- 8.1.4 Sonstige Gerätschaften
- 8.1.5 Alternative Sterilisationsmethoden
- 8.1.6 Auswahl der Detergenzien
- 8.2 Vorbereitung und Sterilisation von Reagenzien und Medien
- 8.2.1 Wasser
- 8.2.2 Physiologische Salzlösungen
- 8.2.3 Medien
- 8.2.4 Herstellung und Sterilfiltration sonstiger Reagenzien
- 8.2.5 Sterilfiltration
- 8.2.6 Sterilitätsprüfung
- 8.2.7 Wachstumstests
- 8.2.8 Lagerung
- 8.3 Gewinnung und Vorbereitung von Serum
- 9 Gewebedissoziation und Primärkultur
- 9.1 Isolierung des Gewebes
- 9.1.1 Mäuseembryonen
- 9.1.2 Hühnerembryonen
- 9.1.3 Menschliches Biopsiematerial
- 9.2 Primärkulturen
- 9.2.1 Kultur von Primärexplantaten
- 9.2.2 Enzymatische Gewebedissoziation
- 9.2.3 Dissoziation in warmem Trypsin
- 9.2.4 Trypsinierung bei 4°C
- 9.2.5 Organanlagen des Hühnerembryos
- 9.2.6 Andere enzymatische Methoden
- 9.2.7 Mechanische Dissoziation
- 9.2.8 Trennung lebender und nicht lebensfähiger Zellen
- 10 Haltung der Kulturen – Zellinien
- 10.1 Nomenklatur
- 10.2 Routinemethoden
- 10.2.1 Mediumwechsel
- 10.2.2 Volumen, Mediumtiefe und Oberfläche
- 10.2.3 Erhaltungsmedium
- 10.2.4 Mediumwechsel oder „Füttern“ einer Kultur
- 10.2.5 Subkultivierung
- 10.2.6 Vermehrung in Suspension
- 10.3 Schlechtes Zellwachstum
- 11 Klonierung und Selektion spezifischer Zellarten
- 11.1 Klonierung
- 11.1.1 Klonieren durch Verdünnung
- 11.1.2 Stimulation der Plattiereffizienz
- 11.1.3 Multischalen
- 11.1.4 Halbfeste Medien
- 11.1.5 Isolierung von Klonen
- 11.2 Selektionsmedien
- 11.3 Isolierung genetischer Varianten
- 11.4 Wechselwirkung mit dem Substrat
- 11.4.1 Selektive Anheftung
- 11.4.2 Selektives Ablösen
- 11.4.3 Beschaffenheit des Substrates
- 12 Physikalische Methoden der Zelltrennung
- 12.1 Methoden auf der Grundlage der Zellgröße und Sedimentationsgeschwindigkeit
- 12.1.1 Spontansedimentation bei 1 g
- 12.1.2 Elutriationszentrifugation
- 12.2 Methoden auf der Grundlage der Zelldichte
- 12.2.1 Isopyknische Sedimentation
- 12.3 Methoden auf der Grundlage der Fluoreszenz
- 12.4 Weitere Methoden
- 13 Charakterisierung von Zellinien
- 13.1 Einführung
- 13.1.1 Identifizierung der Spezies
- 13.1.2 Linien- oder gewebespezifische Merkmale
- 13.1.3 Unikale Marker
- 13.1.4 Transformation
- 13.2 Morphologie
- 13.2.1 Färbung
- 13.2.2 Kulturgefäße für zytologische Untersuchungen an Monolayerkulturen
- 13.2.3 Zytologische Untersuchungen an Suspensionskulturen
- 13.2.4 Photographie
- 13.3 Chromosomenanalyse
- 13.3.1 Chromosomenpräparation
- 13.3.2 Chromosomenbänderung
- 13.4 DNA-Gehalt
- 13.5 RNA- und Proteingehalt
- 13.6 Enzymaktivität
- 13.7 Antigenmarker
- 13.7.1 Indirekte Immunfluoreszenztechnik
- 13.7.2 Indirekte Peroxidasetechnik
- 13.7.3 Peroxidase-Antiperoxidase-Technik (PAP)
- 13.8 Differenzierung
- 14 Induktion der Differenzierung
- 14.1 Stadien der Determination und Differenzierung
- 14.2 Proliferation und Differenzierung
- 14.3 Determination und Differenzierung
- 14.4 Differenzierungsmarker
- 14.5 Induktion der Differenzierung
- 14.5.1 Lösliche Induktoren
- 14.5.2 Zelluläre Wechselwirkungen
- 14.5.3 Zell-Matrix-Wechselwirkungen
- 14.5.4 Polarität und Zellform
- 14.6 Differenzierung und Malignität
- 14.7 Praktische Aspekte
- 14.7.1 Präparation von Collagengel
- 14.7.2 BeSchichtung von Oberflächen mit vernetztem Collagen
- 15 Der transformierte Phänotyp
- 15.1 Was ist Transformation?
- 15.2 Anheftungsunabhängigkeit (Substratunabhängigkeit)
- 15.2.1 Klonierung in Suspension
- 15.2.2 Kontakthemmung und Dichtebegrenzung des Wachstums
- 15.2.3 Wachstum auf konfluenten Monolayern
- 15.3 Genetische Veränderungen
- 15.4 Zellprodukte und Serumabhängigkeit
- 15.4.1 Tumorangiogenesefaktor
- 15.4.2 Plasminogen-Aktivator
- 15.5 Invasives Wachstum
- 15.6 Tumorentstehung
- 16 Kontamination
- 16.1 Arten mikrobieller Kontamination
- 16.1.1 Kontrolle von Kulturen auf Mykoplasmen
- 16.1.2 Fluoreszenztechnik zum Nachweis von Mykoplasmen
- 16.1.3 Alternative Methoden zur Bestimmung von Mykoplasmen
- 16.2 Nachweis mikrobieller Kontamination
- 16.3 Kreuzkontamination
- 16.4 Schlußfolgerungen
- 17 Instabilität, Variation und Langzeitlagerung
- 17.1 Kulturmilieu
- 17.2 Selektives Wachstum, Transformation und Alterung
- 17.3 Genetische Instabilität
- 17.4 Kryokonservierung von Zellen
- 17.4.1 Auswahl einer Zellinie
- 17.4.2 Standardisierung von Medien und Serum
- 17.4.3 Einfrieren von Zellen
- 17.4.4 Auftauen der Zellen
- 17.5 Zellbanken
- 18 Quantitative Erfassung und ihre experimentelle Realisierung
- 18.1 Zellzählung
- 18.1.1 Hämozytometer
- 18.1.2 Elektronische Partikelzählung
- 18.1.3 Färbung der Monolayer
- 18.2 Zellmasse
- 18.3 DNA-Gehalt
- 18.3.1 Bestimmung des DNA-Gehalts von Zellen mit Hoechst 33258
- 18.3.2 Bestimmung des DNA-Gehalts von Zellen mit DAPI
- 18.4 Proteingehalt
- 18.4.1 Zellaufschluß
- 18.4.2 Proteinbestimmung nach Lowry
- 18.4.3 Proteinbestimmung nach Bradford
- 18.4.4 Proteinsynthese
- 18.4.5 DNA-Synthese
- 18.5 Vorbereitung von Proben für Enzym- und Immunoassays
- 18.6 Parallelproben
- 18.7 Wachstumszyklus
- 18.7.1 Latenzphase (lag-Phase)
- 18.7.2 Exponentielle Phase (log-Phase)
- 18.7.3 Plateauphase
- 18.8 Plattiereffizienz
- 18.9 Klonaler Wachstumstest mit der Verdünnungstechnik
- 18.10 Markierungsindex
- 18.11 Mitose-Index
- 18.12 Zellzykluszeit (Generationszeit)
- 18.13 Zytometrie
- 19 Zytotoxizitäts- und Vitalitätstests
- 19.1 Grenzen der In-vitro-Methoden
- 19.2 Art des Testsystems
- 19.2.1 Kurzzeittests (Vitalitätstests)
- 19.2.2 Langzeittests (Überlebenstests)
- 19.3 Mikrotitration
- 19.4 Metabolische Tests
- 19.5 Wechselwirkungen von Substanzen
- 19.6 Screening kanzerostatischer Substanzen
- 19.6.1 Prognostische Tests
- 19.6.2 Kultursysteme
- 19.7 Mutagenität
- 19.8 Karzinogenität
- 20 Kultivierung spezieller Zellarten
- 20.1 Epithelzellen
- 20.1.1 Epidermale Zellen
- 20.1.2 Mammaepithelzellen
- 20.1.3 Cervixepithelzellen
- 20.1.4 Darmepithelzellen
- 20.1.5 Leberparenchymzellen
- 20.1.6 Pankreasepithelzellen
- 20.1.7 Nierenepithelzellen
- 20.1.8 Bronchial- und Trachealepithelzellen
- 20.1.9 Prostataepithelzellen
- 20.2 Mesenchymzellen
- 20.2.1 Bindegewebszellen
- 20.2.2 Fettzellen
- 20.2.3 Muskelzellen
- 20.2.4 Knorpelzellen
- 20.2.5 Knochenzellen
- 20.2.6 Endothelzellen
- 20.3 Neuroektodermale Zellen
- 20.3.1 Neuronalzellen
- 20.3.2 Gliazellen
- 20.3.3 Endokrine Zellen
- 20.3.4 Melanozyten
- 20.4 Hämatopoetische Zellen
- 20.5 Keimzellen
- 20.6 Minimal-Deviation-Tumorzellen
- 20.7 Teratomzellen
- 21 Kultivierung von Tumorgewebe
- 21.1 Materialentnahme
- 21.2 Dissoziation
- 21.3 Primärkulturen
- 21.4 Charakterisierung
- 21.5 Entwicklung von Zellinien
- 21.6 Allgemeine Methoden
- 21.7 Selektionskulturen
- 21.7.1 Selektionsmedien
- 21.7.2 Selektive Substrate
- 21.7.3 Konfluente Feederschichten
- 21.7.4 Klonierung in Suspension
- 21.7.5 Histotypische Kulturen
- 21.7.6 Xenotransplantate
- 21.7.7 Kryokonservieren
- 22 Dreidimensionale Kultursysteme
- 22.1 Organkulturen
- 22.1.1 Gas- und Nährstoffaustausch
- 22.1.2 Strukturelle Integrität
- 22.1.3 Wachstum und Differenzierung
- 22.1.4 Grenzen der Organkultur
- 22.1.5 Arten von Organkulturen
- 22.2 Histotypische Kulturen
- 22.2.1 Schwammtechniken
- 22.2.2 Kapillarperfusion
- 22.2.3 Reaggregation und Sphäroide
- 22.2.4 Filtertechniken
- 23 Spezielle Techniken
- 23.1 Massenkulturtechniken
- 23.1.1 Suspensionskulturen
- 23.1.2 Monolayerkultur
- 23.2 Lymphozytenpräparation
- 23.2.1 Blastentransformation
- 23.3 Autoradiographie
- 23.4 Kultur von Poikilothermenzellen
- 23.5 Synchrone Zellkulturen
- 23.5.1 Zellseparation
- 23.5.2 Blockade des Zellzyklus
- 23.6 Zeitraffer-Mikrokinematographie
- 23.6.1 Videobandaufnahmen
- 23.6.2 Zeitraffer-Filmaufnahmen
- 23.7 Amniozentese
- 23.8 Fusion somatischer Zellen
- 23.8.1 Selektion von Hybridklonen
- 23.9 Gentransfer
- 23.10 Produktion monoklonaler Antikörper
- 23.11 Molekulare Hybridisierung in situ
- 23.12 Präparation und Nachweis von Viren
- 23.13 Schlußbetrachtung
- 24 Reagenzien
- 25 Zellkultur-Bedarfsartikel
- 25.1 Hersteller oder Lieferanten
- 25.2 Adressen
- 26 Glossar
- Literaturverzeichnis
- Register